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l_asym_0_25 [2020/07/24 09:27] Nicolas Schabanel [2020.06.19-07.23] |
l_asym_0_25 [2021/03/05 15:29] |
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| - | ====== L asym 0.25 ====== | ||
| - | ===== 2020.06.15-16 Réception des plaques ===== | ||
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| - | ===== 2020.06.18 Confection des tubes ===== | ||
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| - | * **TAE Mg 10x:** | ||
| - | * **Tube de 2000uL:** TAE 400uL@50x + Mg 250uL@100 + H20 1350uL = TAE 10x + Mg@125mM | ||
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| - | * **Tube n°1: little L** | ||
| - | * 5uL de vertex #4, #7, #17, #20, #24, #31, #34, #37, #48, #52, #53, #55, #67, #68, #70, #83, #85, #98 (18 x 4 strands = 72 strands) = 360uL | ||
| - | * **Tube n°2:** 50uL = 5uL TAE Mg 10x + 5.4uL tube1 + 39.6uL H2O cuit à gauche (~24h 90°C > 15min > 50°C >-0.5°C/15min > 30°C > 8h) | ||
| - | * **Tube n°3:** 50uL = 5uL TAE Mg 10x + 5.4uL tube1 + 39.6uL H2O cuit au milieu (plateau à 33.5°C) | ||
| - | * **Tube n°4:** 50uL = 5uL TAE Mg 10x + 5.4uL tube1 + 39.6uL H2O cuit à droite (plateau à 37°C) | ||
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| - | * **Plaques SHORT** | ||
| - | * **Tube n°5:** 5uL de chaque strand de la plaque n°1 Short | ||
| - | * **Tube n°6:** 5uL de chaque strand de la plaque n°3 Short | ||
| - | * **Tube n°7:** 5uL de chaque strand de la plaque n°4 Short | ||
| - | * **Tube n°8:** 5uL de chaque strand de la plaque n°5 Short | ||
| - | * **Tube n°9:** 5uL de chaque strand de la plaque n°2 Short | ||
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| - | * ** Plaque LONG BA** | ||
| - | * **Tube n°10:** 5uL de chaque strand de la plaque n°1 Long BA | ||
| - | * **Tube n°11:** 5uL de chaque strand de la plaque n°2 Long BA | ||
| - | * **Tube n°12:** 5uL de chaque strand de la plaque n°3 Long BA | ||
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| - | * **Sommets individuels** | ||
| - | * **Tube n°13:** 5uL de chacune des 4 strands du sommet #1 + 80uL H2O = 100uL@10uM | ||
| - | * **Tube n°14:** 5uL de chacune des 4 strands du sommet #14 + 80uL H2O = 100uL@10uM | ||
| - | * **Tube n°15:** 5uL de chacune des 4 strands du sommet #24 + 80uL H2O = 100uL@10uM | ||
| - | * **Tube n°16:** 5uL de chacune des 4 strands du sommet #29 + 80uL H2O = 100uL@10uM | ||
| - | * **Tube n°17:** 5uL de chacune des 4 strands du sommet #30 + 80uL H2O = 100uL@10uM | ||
| - | * **Tube n°18:** 5uL de chacune des 4 strands du sommet #37 + 80uL H2O = 100uL@10uM | ||
| - | * **Tube n°19:** 5uL de chacune des 4 strands du sommet #38 + 80uL H2O = 100uL@10uM | ||
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| - | * **Stock Freezer:** | ||
| - | * **Sommets individuels:** | ||
| - | * Tube n°20 = 50uL de n°13 vertex#1 | ||
| - | * Tube n°21 = 50uL de n°14 vertex#14 | ||
| - | * Tube n°22 = 50uL de n°15 vertex#24 | ||
| - | * Tube n°23 = 50uL de n°16 vertex#29 | ||
| - | * Tube n°24 = 50uL de n°17 vertex#30 | ||
| - | * Tube n°25 = 50uL de n°18 vertex#37 | ||
| - | * Tube n°26 = 50uL de n°19 vertex#38 | ||
| - | * **Plaques Short:** | ||
| - | * Tube n°27 = 240uL de n°5 (short 1) | ||
| - | * Tube n°28 = 240uL de n°6 (short 3) | ||
| - | * Tube n°29 = 240uL de n°7 (short 4) | ||
| - | * Tube n°30 = 100uL de n°8 (short 5) | ||
| - | * Tube n°31 = 240uL de n°9 (short 2) | ||
| - | * **Plaques Long BA:** | ||
| - | * Tube n°32 = 240uL de n°10 (Long BA 1) | ||
| - | * Tube n°33 = 240uL de n°11 (Long BA 2) | ||
| - | * Tube n°34 = 240uL de n°12 (Long BA 3) | ||
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| - | ===== 2020.06.19-07.23 ===== | ||
| - | * **Tube T2' dilué à 1:2000:** 5uL de T2 (little L) dilué à 1:200 + 5uL TAEMg 10x + 40uL H20 -> concentration des strands estimée à 0.15nM mis à cuire le 2020.06.19 à 19:00 pour 2 semaines (cf courbe ci-dessous) | ||
| - | * **Tube L-all à ~200nM:** 5uL de T5, T6, T7, T9 et 2.3uL de T8 + 5uL TAEMg 10x + 23.7uL H20 mis à cuire avec le tube ci-dessus | ||
| - | * **courbe de température suivie:** 90°C (15min) -> 50°C ->[-0.5°C/15min x40]-> [ 30°C (4h) > 32°C (30s) ] x99 (=400h ~17j) -> 28°C (hold pendant 3 semaines de plus) | ||
| - | * Les deux tubes ont été mis au frais le 2020.07.23 à 17:00 dans des tubes sans étiquette | ||
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